介绍一种改良的冷却装置的垂直板电泳槽

本文介绍一种改良的带冷却装置的浸入式垂直板电泳槽。用不会变形的有机玻璃制作固定架及控制凝胶厚度的隔条,以代替市售的可压缩的U形橡胶套。以螺丝固定玻璃板。用医用硅胶管密封以完全分隔正负极电泳缓冲液。经试用于蛋白质及核酸电泳,效果甚佳。
 
电泳是生物化学和分子生物学实验分析的**常用手段之一,电泳时常要求在某一恒定温度中进行,虽然有各种性能不同的带恒温冷却装置的进口电泳槽,但价格昂贵,每台数千**万元以上。国产的垂直板电泳槽虽亦有带冷却装置的,但制备的胶板的厚度一般只有三种,不能随意调整,且常常因为梳的厚度与橡胶套隔片的厚度不一致而致上样孔内有残留凝胶,影响上样及电泳效果。而且,橡胶隔片的厚度受固定两半槽时旋转螺丝松紧程度的影响。为此,在工作中我们参考多种现有垂直电泳槽的样式,自行设计了一种浸入式垂直板电泳槽,简单、价廉而效果良好。
 
1 电泳槽的制作

电泳槽的式样见附图。整个槽由有机玻璃粘合而成,外壳为一个矩形槽,大小为90×150×230cm(可根据需要适当缩小),中间设置一个固定架,用以固定玻璃板并分隔电泳槽为正负极。固定架的具体构造是:在短形槽的左右两侧壁中部的全长上,各粘合两片宽20mm、长230arm、厚5mm以上的有机玻璃片,两片相距20mm。前面两片各钻三个有罗纹的孔,后面两片的底部由一高15mm的有机玻璃长条相连,成一整块,呈u形,且与槽底牯合,不漏液体。
 
2 安装及灌胶
安装玻琉板灌胶时,把电泳槽平卧,固定架上有孔的有机玻璃片朝上,u形架在下。在U形架的上面放一医用硅胶管,亦使变成u形,其上放一210×150mm大小的玻璃板,板的底部伸入**电泳槽底部,板上两侧放两片隔片,各10-15×230mm,厚度随电泳时所需凝胶的厚度而定。隔条上再放一块玻璃板,大小225×150mm,板的底部离电泳槽底部3mm左右。**后,在固定架的罗纹孔上放上塑料螺丝,并逐渐旋紧,此时,硅胶管逐渐被压扁、压紧,两玻璃板亦被固定,整个电泳槽被分成前后两个槽:前槽为正极,后槽为负极。两槽分别放置玻璃弯管,通入恒温水,即可维持电泳缓冲液及浸于其中的凝胶温度的恒定。灌聚丙烯酰胺凝胶时,玻璃板底部用琼脂糖凝胶封好,或用其它方法密封,然后如常灌胶,加梳。
 
3 讨论
浸入式垂直板电泳槽的优点是缓冲液槽中装有恒温冷却水装置,使电泳缓冲液能保持在某一设定温度,而电泳凝胶板浸在缓冲液内,电泳时凝胶产生的热量被缓冲液带走,从而使电泳能在恒定温度下进行。因此电泳效果比不带恒温装置的电泳槽要好。市面销售的国产垂直板夹心冷却式电泳槽虽有上述优点,但因凝胶板的厚度由橡胶隔条的厚度决定,后者随固定力量的大小而略有改变;更有甚者,橡胶隔条的厚度与所配的有齿梳的厚度常略有差别,一般是有齿梳略薄一些,这样,灌制好的凝胶的上样孔内常有少量残留凝胶,使所加样品不整齐,严重影响电泳效果。有鉴于此,我们设计了上述电泳槽,灌制聚丙烯酰胺凝胶板时,凝胶厚度由有机玻璃或其他塑料做的隔条来控制,而有齿梳和隔条可用同一块板切割而成,因此厚度均匀,上样孔生成良好,随意选用不同厚度的板做隔条和梳,即可制备不同厚度的凝胶板。
 
我们采用旋紧螺丝以固定并压紧玻璃板和隔条,灌制凝胶板时不会漏液体,同时在较低的一块玻璃板的后面三边放置一弹性良好的硅胶管,这样,旋紧螺丝的同时亦压紧硅胶管而把两缓冲液槽完全隔开并密封,电泳时不会发生短路。上述装置,经试用于蛋白质电泳和DNA的单链构像多态性(SSCP)分析,效果甚佳。

(生物学杂志 冯铮,曾山等)

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