电泳槽DYCZ-21垂直平板电泳操作方法

1. 电泳前,禁止将电泳槽附带的电泳导线连接到电泳仪上;
2. 制做胶室(三种方法):
1.) 密封条密封:先将平凹两块玻璃板合在一起,用密封条;(1mm 胶板用空心塑料管;1.5mm 胶板用实心硅胶条),从右上角沿玻璃条外侧嵌入,放好一侧后,左手捏住两块玻璃
,右手用夹子夹住玻璃的右上端.然后再把密封条嵌入下端和左侧.(如不好放可用相应厚度的试样格轻轻推入) 密封条嵌好后,玻璃板的两侧分别用两个夹子夹好,下端的两个夹子可直接立在实验台上,也可与胶室支架夹在一起。胶凝结后,再去掉胶条;2.) 凡士林密封:把带有玻璃条的玻璃板平放在试验台上,用 10ml 注射器沿玻璃板三边涂上凡士林。玻璃条处少涂,下端多涂,下端凡士林线条要高于玻璃条。再把凹玻璃板放在上面,这样就成为一个胶室。将胶室立于胶室支架的活动长柱上,沿玻璃条正中夹好铁夹,以凹口边线为基准,向下在玻璃板上标出灌胶高度记号。电泳时注意把下端凡士林去掉;
3.) 琼脂槽密封:先将琼脂密封槽放入电泳槽中.将平玻璃板的玻璃条处涂上少许凡士林,然后与凹玻璃合在一起,玻璃板下端放入琼脂槽中,并用夹子与电泳槽的主板一起夹好。把配好的琼脂糖溶液倒入琼脂密封槽中。待琼脂糖溶液聚合后,既可灌胶。
3. 灌胶:
1.) 灌分离胶:灌胶前再次检查密封情况,用左手将胶室支架倾斜拿着,右手将抽气三角瓶内的溶液沿凹玻璃板口灌**标记高度处,根据灌胶水平记号将胶室支架垫平,沿凹玻璃板口面小心地覆盖一层抽气后的重蒸水待凝;
2.) 灌浓缩胶:待分离胶聚合后,抽去覆盖水,用少许浓缩胶溶液冲洗分离胶面,灌浓缩胶溶液**凹玻璃口3mm 处,插进试样格(梳子)待凝;3.) 灌淀粉胶和琼脂糖胶:将淀粉和琼脂糖用缓冲液配成所需浓度的溶液,煮**透明,于50℃~60℃从凹口正中灌入胶室,立即放上试样格;
4. 拨出试样格:拨出试样格前,先轻轻摇动,然后小心拨出,如加样槽不正,可用长针头扶正;
5. 装胶室:如采用
1、2 两种制胶方法,胶室放入电泳槽时下端应倾斜一定角度,以便赶走气泡。将胶室凹玻璃板紧靠电泳槽立板的凹口处,并与立板上的密封条接触,并夹紧铁夹,(如做一块胶,另一边需用方玻璃板挡上),在玻璃板试样格底端位置上作上记号,便于加样时识别位置;
6. 排气泡:上下槽各加满预冷电泳液,用9 号兽用长针头(磨平针尖)弯成“J”形,抽净槽底胶面的气泡,接通电源(上负下正)预电泳;
7. 加样:用取液器吸取30μl~50μl 样品溶液插入样品槽底部,慢慢注入样品(样品含甘油或蔗糖),逐渐排除样品槽中的电泳液;
8. 加挂冰槽:加样后为防止漂样,需在室温下原地不动电泳一小时,才能将电泳槽移入冰箱,当室温过高时,可将冰块装入挂冰槽,挂在方玻璃板上降温,冰块要放均匀,以免影响迁移率;
9. 电泳:先使上槽电极与电泳仪的负极相连,下槽电极与电泳仪的正极相连,检查无误后接通电泳仪即可电泳。电泳过程中禁止人体与电泳槽接触;
10.结束电泳:电泳实验结束后,先关掉电泳仪,然后拔掉电源导线,吸出上下槽内的缓冲液(分别保存、可重复使用),松开夹子,取下胶室,去掉凹玻璃板和板条。用刀片沿浓缩胶和分离胶界面切开一条线,去掉浓缩胶,将分离胶进行染色、脱色等后续处理。

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