电泳方法简介

电泳技术发展迅速,方法种类繁多,以下简单介绍几种电泳方法。
4.3.1 纸电泳
纸电泳(PE)是指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是**早使用的区带电泳,由于操作简单方便,因此在很多领域得以广泛应用。比如,分离、确定某些蛋白质,如糖蛋白、脂蛋白等,尤其是在分离氨基酸的混合物时,PE 是一种很有价值的分析技术。在这种平卧式滤纸电泳装置(见图6-2)中,将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间,样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后,再盖上绝缘密封罩,即可由电泳电源输入直流电压(100V~1000V)进行电泳。
4.3.2 乙酸纤维素薄膜电泳
乙酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素乙酸酯。由该物质制成的薄膜称为乙酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。
4.3.3 凝胶电泳
由区带电泳中派生出一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式,被称为凝胶电泳。因此,该凝胶适合于免疫复合物、核酸与核蛋白的分离、鉴定及纯化。在临床生化检验中常用于LDH、CK 等同工酶的检测。
4.3.4 等电聚焦电泳
等电聚焦电泳是20 世纪60 年代中期问世的,一种利用有pH 值梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。因为这种电泳方法具有很高的分辨率,所以在等电点上只要有0.01pH 单位的差异就能被满意地分离。因此,特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。
等电聚焦电泳法的特点①使用两性载体电解质,在电极之间形成稳定、连续、线性的pH 梯度;②由于“聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面;③电泳速度快;④分辨率高;⑤加入样品的位置可任意选择;⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。
4.3.5 等速电泳
等速电泳(CITP)是一种“移动界面”电泳技术。是电泳中惟一的分离组分与电解质一起向前移动,同时进行分离的电泳方法。同等电聚焦电泳一样,等速电泳在毛细管中的电渗流为零,它采用两种不同浓度的电解质组成,一种为前导电解质,充满整个毛细管柱;另一种为尾随电解质,置于一端的电泳槽中。图6-3 是阴离子等速电泳示意图。CITP 适用于小离子、小分子、肽类及蛋白质的分离。
等速电泳特点: 一是所有谱带以同一速度移动。二是区带锐化。三是区带浓缩。
4.3.6 双向凝胶电泳(二维电泳)
双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)技术又称二维凝胶电泳技术,是目前常用的**一种能够连续地在一块胶上分离数千种蛋白质的方法,**向采用等电聚集电泳。第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳。广泛应用于生物学研究的各个领域,其原理是将高分辨率的等电聚集电泳和SDS-PAGE 电泳联合组成双向电泳。
4.3.7 免疫电泳
免役电泳是电泳分析与沉淀反应的结合产物。该技术有两大优点:一是加快了沉淀反应的速度,二是将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开,再与抗体起反应,从而使本法更为微量化、多样化。因此,其应用范围日益扩大。
该方法可以用来研究:①抗原和抗体的相对应性;②测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率;
③根据蛋白质的电泳迁移率,免疫特性及其他特性,可以确定该复合物中含有某种蛋白质;④鉴定抗原或抗体的纯度。

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