北京六一DYY-6C电泳仪使用说明书

用途及适用范围
本产品与电泳仪组成等电聚焦电泳分析装置。等电聚焦是利用载体两性电解质在外加电场的作用下,形成稳定的 PH 梯度,使得蛋白质,酶及多肽按其各自不同的等电点聚焦在相应的 PH 位置上,达到分离的手段。薄层等电聚焦分析电泳可以在一块薄层胶片上分析多个样品。
主要结构
主要由上盖、电级架、冷却板、制胶隔条、电泳导线等组成。
规格与性能
1、凝胶板尺寸: 215mmχ90mmχ0.4mm。
2、电极采用耐电解腐蚀、耐高温、纯度≥99.95%的贵金属、制造,具有良好的导电性能,并且便于清洗、维修和更换。
3、正常工作条件为:环境温度 0℃~40℃;相对湿度≤80%;周围无强烈振动;实验台应平整。
4、电泳槽可连续工作时间≥24h。
5、允许使用外接电源**大电压为 1600V。
6、外型尺寸(L×W×H)335mm×150mm×75mm。
7、重量 2200g。
使用说明
电泳前,禁止将电泳槽附带电源导线连接到电泳仪电源上。
制胶:
1、置凝胶溶液。
2、架制胶室。在一块玻璃的两边各放一根制胶隔条,(或制胶方框)然后把另一块玻璃放在上面,用夹子夹好两块玻璃板便制成了一个胶室。下端不需要密封。
3、灌胶。将胶室平放在平台上,把配好的凝胶溶液吸入一只注射器中,直接灌入制好的胶室中。注意灌胶时胶室要从玻璃板的一侧逐渐灌入,同时用手指弹击胶室,以避免在灌入的凝胶溶液中产生气泡。灌入的胶液在液体的张力作用下是不会泄漏的。这样灌满凝胶溶液的胶室在室温条件下放置 2 小时,溶液即凝固成胶了。
 
4、保存。如果当天就要进行电泳,凝固的薄层胶片需在 4℃冰箱中放置 1 小时,然后取出使用。如果不是当天使用,则可以把凝固的薄层胶片放入一个低温的湿室环境内保存。用
普通的大号培养皿,按其大小剪好两张圆形滤纸片,滴上少许蒸馏水使之浸湿,贴在皿内的上下表面,即成为一个简易的湿室。这样把薄层胶片放入其中,保存在 4℃冰箱内,可
供数周之内使用。
样品的预处理
样品的高盐浓度影响载体两性电解质 PH 梯度的形成,从而导致区带的歪斜,对这样的样品需要事先透析除盐。样品的低盐浓度不利于蛋白质溶解,常用 1%甘氨酸或载体两性电解质为溶剂溶解这样的蛋白质样品。某些蛋白质在其等电点附近沉淀,可以在凝胶中加入尿素,无离子或两性离子去垢剂来助溶。此外,样品应预先去除颗粒,以免它们停留在加样处,造成拖尾现象。
样品的施加
揭开部分胶框,用两个小钢铲,旋转另一个小钢铲,揭去上层的玻璃板。注意要小心的操作,避免薄层胶片脱离下层的玻璃板。
样品直接加在薄层胶片上有许多种方式。一般是用一叠 8 层的擦镜纸,剪成 0.4×0.5cm的小方块,先贴在胶片上,再用微量注射器滴加一定量的样品;亦可以把小块直接浸入样品溶液中,再贴在胶片上,这样的加样量大约为 10μl。加样量一般按所分析样品中蛋白质的类型和数目而定。用考马斯亮蓝染色,一般可加蛋白质 1—10μg;用酶活性染色,可依所显示的酶的区带的深浅程度来调整酶样品的浓度。
电极液的施加
电极液采用 1MHaPO4 为阳极液,1MNaOH 为阴极液,以适应 PH3.5-10.0 范围的载体两性电解质形成相应的 PH 梯度。
用 3 片为一叠的.5mm 宽的 whatmanl#滤纸条来浸湿电极液,然后分正负极,贴加在薄层胶片的两端。电极滤纸条要贴加得平行,以便使铂金丝电极正好压在它们的上面。
电泳的条件
把载有加好了样品和电极滤纸条的薄层胶片放在电极架的下架上,盖好上架,使得电极丝和电极滤纸条充分接触,成为一体,接通正负电极,即可开始电泳。
这样简单的薄层等电聚焦电泳在 4℃冰箱中进行,如需要也可在室温下通冷却水电泳。
一般所给的条件是:起始电压为 60V,15 分钟调** 120V,转而恒流,每厘米胶片长度 0.8—1.0mA,约 1 小时左右,电压便上升到 600—700V,维持 3—3.5 小时即可结束电泳。
PH 梯度的测定
把 1 ×7cm的薄层切下来,从正极端到负极端切分为 14 等份,每份加 0.4ml 重蒸水,搅碎后用微量电极在一般的酸度计上测定它们的 PH 值,依此数据描绘出 PH 曲线。
染色及保存
蛋白质染色步骤如下:1、5%磺基水杨酸+10%三氯醋酸(W/V)固定 1 小时;2、过脱色液 35%无水乙醇+10%冰醋酸(W/V)45 分钟;3、染色液 0.2%考马斯亮蓝 R250
的脱色液溶液(W/V)染色 30 分钟;4、置脱色液(同 2)中,37℃温箱内过夜。
小肽染色步骤如下:1、10%三氯醋酸固定过夜;2、染色液染色三小时,染色液的配制是 50ml 考马斯亮蓝 G250 加 50ml21mol/LH2SO4,不断摇动 3 小时,过滤,取 9ml 滤液
加 1ml10mol/LKOH,然后加 1.36ml100%三氯醋酸。3、用蒸馏水漂洗背景。
活性染色依特异的组织化学方法进行。
染色后的胶片可放在 20%甘油中或放在温室的环境中,在冰箱中保存,也可制成干片。
等电点的测定
测量染色后所分离的区带距正极端的长度,按 PH 曲线找出其响应的等电点来。
 
日常维护与保养
包装后的产品贮存环境温度应在- 40℃~55℃、相对湿度不超过 93%、无腐蚀性气体和通风良好的室内,时间 15 周以内。
平时注意保持电泳槽清洁。使用后要彻底清洗,可用海绵沾少许洗衣粉、洗涤剂清洗,再用无离子水冲洗干净,放在无灰尘处晾干备用。
关于与本品配套使用的电泳仪
我厂生产的电泳仪电源规格型号较多,常规型号均可满足本产品的配套。除 DYY-1CDYY-7C 型外均可使用。
电泳仪的使用必须严格按其使用说明书操作。
本产品工作时应与电泳仪分开一定距离,严禁放在电泳仪上使用。
注意事项
本产品主体及部分配件均为易碎品,包装、运输、使用中均应谨防——高处跌落、碰撞;槽体内安装的铂丝电极易断裂,使用中应小心操作。

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