Western Blot 实验试剂选购指南

(一)蛋白质电泳

1.请参照常规电泳操作.

2.分子量标准:

可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:

优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率.

缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠**;影响蛋白质与膜的结合力.

购买信息:

中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)
V5235S
200μg
**产
80元
分子量大小:(14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD)
中范围蛋白质分子量标准(24-97KD)
MTB087-1
20次
**产
80元
分子量大小:(24、36、53、66、97KD)
低范围蛋白质分子量标准(6.5-66KD)
M3913-1
20次
Sigma
280元
低范围蛋白质分子量标准(6.5-66KD)
M3913-1
5×20次
Sigma
1198元
分子量大小:(6.5、20、24、29、36、45、66KD)
高范围蛋白质分子量标准(36-205KD)
M3788-1
20次
Sigma
280元
高范围蛋白质分子量标准(36-205KD)
M3788-1
5×20次
Sigma
1198元
            分子量大小:(36、45、55、66、84、97、116、205KD)
宽范围蛋白质分子量标准(6.5-205KD)
M4038-1
20次
Sigma
280元
宽范围蛋白质分子量标准(6.5-205KD)
M4038-1
5×20次
Sigma
1266元
分子量大小:(6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD)
预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD)
 
20次
自产
320元
预染的低范围蛋白质分子量标准(18-80KD)
 
50次
自产
680元
分子量大小: 80, 60, 39, 23, 18 kDa
预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD)
 
20次
自产
320元
预染的中高范围蛋白质分子量标准(20-210KD)
 
50次
自产
680元
分子量大小:210, 140, 106/102, 80, 52, 20 kDa
预染的中高范围蛋白质分子量标准(18.3-210KD)
26681
48次
Pierce
1214元
(二)蛋白质转印

a)膜的选择:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比较如下:

 
NC膜
PVDF膜
物理强度
蛋白质结合能力
80-100ug/cm2
100-200ug/cm2
溶剂耐受力
考马斯亮兰染色
可以
ECL检测
稍差
可以
快速**检测
可以
SDS存在下蛋白质结合
质谱分析
可以
(尼龙膜和NC膜的特点相似,主要用于核酸杂交)

b)膜的大小: 请根据胶的面积来确定.

c)膜的孔径: 0.45μm适用一般蛋白质.0.2μm适用小分子蛋白质.

购买信息:

66485
硝酸纤维素膜,0.45um,30cmX3m/卷
美**Gelman
1395元/卷
 
硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm
美**Gelman
80元/张
 
硝酸纤维素膜,0.45um,20cmX20cm
**产
30元/张
60207
尼龙膜, 0.45um,30cmX3m/卷
美**Gelman
2310元/卷
 
尼龙膜, 0.45um,20cmX15cm
美**Gelman
90元/张
 
尼龙膜, 0.45um,直径100mm,50张/盒
**产
260元/盒
66543
PVDF膜, 0.45um,30cmX3m/卷
美**Gelman
1690元/卷
 
PVDF膜, 0.45um, 直径100mm,50张/盒
**产
260元/盒

(三)蛋白质的显示(大部分实验不需要进行此步操作)

蛋白质染色的染料有很多种,各种的特点均不一样.

 
蛋白质灵敏度
影响**检测
Ponceau-S Red丽春红
5ug
快绿Fc
5ug
Sypro Rose
1-2ng
氨基黑10B
1ug
考马斯亮兰R-250
500ng
印度墨
100ng
胶体金
4ng
购买信息:
Ponceau-S Red丽春红
Sigma原装
10g
182元
快绿Fc
Amresco分装
25g
258元
氨基黑10B
Sigma分装
10g
168元
考马斯亮兰R-250
Amresco分装
10g
168元
蛋白银染试剂盒
自产MTB083-1
10次
188元
SDS-PAGE蛋白快速染色试剂
自产
25次
100元
Western Blot 膜可逆染色剂
自产
100ml
100元
(四)**检测

有各种不同的**检测方法.请注意选择.方法不同,则所需的试剂也不同.如需方便,可选择完整的试剂盒.

A.封闭膜:

这一步会影响结果的成败和背景的强度.常用封闭剂为BSA和Tween20.脱脂干奶粉不适合用于糖蛋白和生物素标记抗体.

购买信息:

牛血清白蛋白组份五BSA
Amresco分装
25g
280元
Tween 20
Amresco分装
500ml
150元
Western Blot 膜封闭剂
自产
100ml
100元

B.一抗: 根据目的蛋白质选择.单抗或多抗均可.注意已变性蛋白质无法检测,**采用非变性胶电泳.我司有 R&D,Genex,Santa Cruz等公司的原装抗体或进口分装抗体.具体请参见**学部分产品----**抗体.

C.标记二抗: 根据一抗的来源选择二抗.

购买信息: 请参见**学部分试剂---各种标记抗体

D.底物系统: 采用常规底物或化学发光底物.

(1)显色法: 常用底物为BCIP/NBT或DAB .此法简单,但灵敏度不高,并难以从膜上去除.

(2)化学发光法: 目前比较常用的方法.灵敏度较高,检测时可采用X光胶片或CCD成像系统.

不同显色方法产品比较如下:

 
厂家
灵敏度
方法
SuperSignalâ West Pico 化学发光底物
美**Pierce
皮克级
化学发光法
SuperSignalâ West Dura 持久性化学发光底物 
美**Pierce
低飞克级
化学发光法
SuperSignalâ West Femto 高灵敏度化学发光底物
美**Pierce
飞克级
化学发光法
ECL Kit
Amersham
飞克级
化学发光法
BCIP/NBT  (AP酶)
 
100pg
显色法
DAB      (HRP酶)
 
100pg
显色法
推荐产品:

SuperECL Plus Western Blotting 超敏发光液

采用独特的发光底物系统,是**上**灵敏的ECL Western Blot 化学发光试剂。用于Western Blotting 条带的荧光发光,检测直接或间接标记辣根过氧化物酶HRP 的抗体及其关联的抗原。由两种溶液组成,使用前混合。SuperECL Plus 超敏发光液,价格低廉,灵敏度大大高出Amersham 和Santa Cruz 公司同类ECL 产品100 倍以上,也明显高出Pierce 的SuperSignal West Pico 化学发光系统数倍,但背景更干净,发光时间持久,可以长达10 小时以上。

特别适用于丰度极低而一般ECL 系统难于检测的目的蛋白。
 

特点如下:

ж 灵敏度极高,可检测10-100 fg 抗原。

ж 高信噪比,背境干净。

ж 发光迅速。

ж 发光持续12小时以上。

ж 可在日光灯下进行发光操作。

ж 节省抗体(一抗1:2000-1:6000;二抗1:4000-1:10000)。

ж 储存条件:4℃避光储存一年,偶尔室温放置数周不影响质量。

购买信息

产品名称
规格
编号
价格
SuperECL Plus Western Blotting 超敏发光液
10ml
P1010-10
138
25ml
P1010-25
266
100ml
P1010-100
880

美**Pierce公司化 学 发 光 底 物 系 列

SuperSignalâ 底物家族提供一系列的底物,适合**印迹的多种灵敏度要求。
 
SuperSignalâ West Pico化学发光底物
SuperSignalâ West Dura 持久性化学发光底物
SuperSignalâ West Femto Maximum Sensitivity Substrate
更低检测极限(克)
10-12
10-14
10-15
建议抗体稀释度
一抗:1/1,000-1/5,000
一抗:1/1,000-1/50,000
一抗:1/5,000-1/100,000
二抗:1/20,000-1/100,000
二抗:1/20,000-1/250,000
二抗:1/100,000-1/500,000
信号持续时间
6-8小时
24小时
8小时
工作溶液稳定性
室温24小时
室温24小时
室温8小时
贮藏液存放时间
室温1年
室温1年
室温6个月或4°C一年
推荐印迹膜
硝化纤维
硝化纤维或PVDF
硝化纤维或PVDF
 
[email protected] West Pico 化学发光底物
特征
优点
经济:比任何其它化学发光底物产品花费更少。
更长发光时间:强光发射超过一个工作日,获得你想要曝光次数。
高强度:信号比其它基于发光胺的系统强两倍。
皮克级灵敏性:高度灵敏性可快速显色较宽水平范围内的蛋白质。
优良的稳定性:24小时工作溶液稳定性;在运输条件环境下**少可稳定1年。
[email protected] West Dura 持久性化学发光底物
特征
优点
24小时发光时间:比任何其它改良的HRP化学发光底物提供的要长10倍;为发表质量的印迹提供更多的曝光
极好的灵敏度:具**的10-15 克级灵敏度
节省抗体:使用Super Signal â West Dura 伸展持续期底物比用其它化学发光底物,抗体稀释度可高得多。
立即产生强烈信号,易被胶片或化学发光检测系统检测
工作浓度**少稳定24小时;试剂盒在运输条件下可稳定**少一年
[email protected] West Femto **高灵敏度化学发光底物
特征
优点
释放由化学发光系统产生的**强信号;使胶片或图象仪系统成像更容易达到可能检测蛋白质的**低限:10-15 克
经济:使宝贵的一抗稀释度可达1/100,000
Lumi-PhosTM West Blotting 化学发光底物
PIERCE 基于碱性磷酸酶检测系统的化学发光底物,其同时具有两个特色:高强度信号和较低的背景。

定货信息

目录号
产品名称
包装
价格
SuperSignalâ West Pico化学发光底物
34080
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
500ml
2178
34077
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
100ml
647
34079
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate Trial Kit
50ml
383
SuperSignalâ West Dura持久性化学发光底物
34075
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate
100ml
3643
37071
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate Trial Kit
20ml
805
SuperSignalâ West Femto**高灵敏度化学发光底物
34095
SuperSignal® West Femto Maximum Sensitivity Substrate
100ml
3828
34094
SuperSignal® West Femto Maximum Substrate Trial kit
20ml
950

4.Western Blotting检测试剂盒

我们开发了此步**检测的完整的试剂盒,即HRP标记的二抗检测系统(含封闭液,洗液,底物,HRP/亲和素-二抗),您只需准备好一抗,并选择和一抗动物来源相应的试剂盒就可以.对于实验来说,采用完整的试剂盒可以避免各种试剂的不匹比而带来的结果不理想.

Western Blotting DAB显色法检测试剂盒

试剂盒的内容:

(1)封闭试剂:10g蛋白质干粉2包。

(2)浓缩抗体稀释液:20ml×2瓶,为10倍浓缩液。

(3)过氧化物酶标记二抗。1ml。效价1:200―400

(4)DAB浓缩液10ml(×40倍)

购买信息:

Western Blotting DAB显色kit(大鼠IgG)
SA2023
**产
550元
Western Blotting DAB显色kit(山羊IgG)
SA2021
**产
550元
Western Blotting DAB显色kit(兔IgG)
SA2022
**产
550元
Western Blotting DAB显色kit(小鼠IgG)
SA2020
**产
550元
SuperSignal West Pico His蛋白Western检测试剂盒
15168
Pierce
3268元
CL-Xposure X 光胶片(5”x7”)    
34090
Pierce
100张
1054元
CL-Xposure X 光胶片(8”x10”)    
34091
Pierce
100张
2121元
柯达X 光胶片(5”x7”)
 
合资
100张
200元