Bcl-2原癌基因的检测

Bcl-2原癌基因被认为是哺乳动物细胞凋亡过程中的负调控剂。本法采用鼠抗Bcl-2单克隆抗体,可通过免疫组化或免疫细胞化学的方法用于检测组织或细胞中的Bcl-2,或者通过Western blots检测细胞粗提物。

样本来源

1. 离心细胞;

2. 细胞涂片、冰冻或石蜡包埋组织切片;

3. 细胞粗提物。

材料与试剂

1. 鼠抗Bcl-2单克隆抗体;

2. 碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP);

3. PBS缓冲液

操作步骤

1. 标本固定:用丙酮或甲醇将标本(冰冻组织切片或新鲜组织涂片)固定于玻片上,-20℃,10分钟;

2. 抗Bcl-2抗体(1:40~1:80)室温孵育1小时;

3. PBS洗三次;

4. 用抗鼠抗体(桥联抗体)室温孵育1小时;

5. PBS洗三次;

6. 在APAAP溶液中孵育,室温30分钟;

7. PBS洗三次;

8. 加入Fast Red 底物直到出现明显的红色;

9. 以苏木素复染、封片、观察结果;

结果判断

Bcl-2蛋白显红色。

注意事项

Western blot方法中抗Bcl-2抗体与26KD的Bcl-2原癌基因产物结合。在离心细胞、细胞涂片、冰冻组织切片,抗体可与Bcl-2蛋白中的41-54位氨基酸结合。在常规固定的石蜡包埋组织切片中,由于抗原表位被封闭,因此抗体仅与较少量细胞反应。

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