PAGE胶上蛋白质的银染方法

PAGE胶上蛋白质的银染方法有数百种,其原理相似,具体步骤各不相同。银染为蛋白质的非特异性染色,呈“爆炸性”反应模式,用于蛋白定量时准确性差,但其敏感度高、简便易行,仍被广泛应用。下面列举的这三种方法为常用的双向电泳凝胶染色法,可与质谱兼容。其中方法1敏感性**高,方法3背景**低、对比度好。

1. Blam silver staining protocol (Modified)

程序 溶液 时间
固定 40%ETOH
10%HAC
1小时
漂洗 30%ETOH 2×20min
致敏 0.02%Na2S2O3 1min
漂洗 H2O 3×20Secs
染色 0.1%AgO3(预冷) 4℃,20mins
漂洗 H2O
H2O(更换盘子)
3×20Secs
1min
显色 3%Na2CO3
0.05%甲醛
 
漂洗 H2O 20Secs
中止 5%Hac  
漂洗 H2O 3×10min
贮存 1%Hac,4℃  

2. EMBL Silver Staining Protocol

程序 溶液 时间
固定 50%MeOH
5%HAc
20min
漂洗 H2O 2hr或过夜
致敏 0.02%Na2S2O3 1min
漂洗 H2O 2×1min
染色 0.1%AgO3(预冷) 20mins
漂洗 H2O 2×1min
显色 2%Na2CO3
0.04%甲醛
 
中止 5%Hac  
漂洗 H2O 3×10min
贮存 1%Hac,4℃  

3. Vorum Silver Staining Protocol

程序 溶液 时间
固定 50%MeOH
12%HAC
0.05%甲醛
2hr或过夜
漂洗 35%ETOH 3×20min
致敏 0.02%Na2S2O3 2min
漂洗 H2O 3×5mins
染色 0.2AgNO3
0.076%甲醛
20mins
漂洗 H2O 3×5mins
显色 3%Na2CO3
0.05%甲醛
0.0004% Na2S2O3
 5mins
中止 50%MeOH
12%HAc
 
贮存 1%Hac,4℃  

 注意事项:

1.应严格按照操作步骤进行;

2.显色前**好更换新染色盘;

3.显色时变为黄色或棕色后立即弃去,更换新鲜显色液,一般来说染一块胶应配制500ml染液。更换2-3次;

4.市售甲醛的浓度为37%;

5.三种方法均与质谱兼容,Blum法敏感性高,但背景呈淡黄色,EMBL法次之但背景较低,染色点较黑。Vorum相对不敏感,但背景清晰,信噪比高。

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