PAGE胶上蛋白质的银染方法有数百种，其原理相似，具体步骤各不相同。银染为蛋白质的非特异性染色，呈“爆炸性”反应模式，用于蛋白定量时准确性差，但其敏感度高、简便易行，仍被广泛应用。下面列举的这三种方法为常用的双向电泳凝胶染色法，可与质谱兼容。其中方法1敏感性**高，方法3背景**低、对比度好。
1. Blam silver staining protocol (Modified)
| 程序 | 溶液 | 时间 |
|---|---|---|
| 固定 |
40%ETOH 10%HAC |
1小时 |
| 漂洗 | 30%ETOH | 2×20min |
| 致敏 | 0.02%Na2S2O3 | 1min |
| 漂洗 | H2O | 3×20Secs |
| 染色 | 0.1%AgO3(预冷) | 4℃，20mins |
| 漂洗 |
H2O H2O(更换盘子) |
3×20Secs 1min |
| 显色 |
3%Na2CO3 0.05%甲醛 |
|
| 漂洗 | H2O | 20Secs |
| 中止 | 5%Hac | |
| 漂洗 | H2O | 3×10min |
| 贮存 | 1%Hac,4℃ |
2. EMBL Silver Staining Protocol
| 程序 | 溶液 | 时间 |
|---|---|---|
| 固定 |
50%MeOH 5%HAc |
20min |
| 漂洗 | H2O | 2hr或过夜 |
| 致敏 | 0.02%Na2S2O3 | 1min |
| 漂洗 | H2O | 2×1min |
| 染色 | 0.1%AgO3(预冷) | 20mins |
| 漂洗 | H2O | 2×1min |
| 显色 |
2%Na2CO3 0.04%甲醛 |
|
| 中止 | 5%Hac | |
| 漂洗 | H2O | 3×10min |
| 贮存 | 1%Hac,4℃ |
3. Vorum Silver Staining Protocol
| 程序 | 溶液 | 时间 |
|---|---|---|
| 固定 |
50%MeOH 12%HAC 0.05%甲醛 |
2hr或过夜 |
| 漂洗 | 35%ETOH | 3×20min |
| 致敏 | 0.02%Na2S2O3 | 2min |
| 漂洗 | H2O | 3×5mins |
| 染色 |
0.2AgNO3 0.076%甲醛 |
20mins |
| 漂洗 | H2O | 3×5mins |
| 显色 |
3%Na2CO3 0.05%甲醛 0.0004% Na2S2O3 |
5mins |
| 中止 |
50%MeOH 12%HAc |
|
| 贮存 | 1%Hac,4℃ |
注意事项：
1.应严格按照操作步骤进行；
2.显色前**好更换新染色盘；
3.显色时变为黄色或棕色后立即弃去，更换新鲜显色液，一般来说染一块胶应配制500ml染液。更换2-3次；
4.市售甲醛的浓度为37%；
5.三种方法均与质谱兼容，Blum法敏感性高，但背景呈淡黄色，EMBL法次之但背景较低，染色点较黑。Vorum相对不敏感，但背景清晰，信噪比高。
