灌胶注意事项及问题解答

一、注意事项
1.  清洗厚薄两块玻片:初次使用需要用酒精棉球擦拭干净。经常使用用自来水冲洗干净后,再用单蒸水冲洗,晾干。也可用酒精擦拭。

2.  取合适大小,容器将各液体依次加入,在加AP和TEMED前将玻璃片放入casting frame 做成glass plate sandwich,放在水平桌面上锁定后,固定在casting stand上,注意垂直放置,压紧底面的胶条,以防漏液。
 
二、常见问题及解答
1.  两快玻璃板之间灌胶,胶为什么总是不平?
(1)  你的玻璃洗干净没有?应该要洗得非常干净!
(2)  过硫酸铵和TEMED的加量不合适,加量相对较多,凝胶凝固过快也会胶不平,**多按照分子克隆加倍。
(3)  加完试剂以后没有很好的摇匀,导致有些部位的聚合剂浓度过高,聚合相对较快造成胶不平。
(4)  稍微注意手法,均匀加入。
(5)  灌胶后应该用水或者正丁醇压胶面或用20%的乙醇封顶(没有毒性可以除气泡,使用效果极好)。战友小新723认为:“**天灌胶后,用乙醇直接压,待乙醇挥发完毕后,上面加一层水,第二天电泳用,效果很好。不用正丁醇,乙醇比正丁醇效果要好多了”。
(6)  边缘胶是不容易聚合完全的,灌完胶后要立即加无水正丁醇覆盖,浓度越低的胶越不要使用双蒸水压顶,另外还可以在压顶试剂如正丁醇中添加少许AP来增加边缘胶的凝聚强度
(7)  温度也是影响胶聚合的重要因素,我们有些同学为了让胶更快的凝固而把胶放到50度的温箱,由于受热不均匀,造成胶聚合不均匀。

2.  胶为什么总是漏?
(1)  每次电泳完后,洗净玻璃、胶条和其它附件,下次用之前,用75%酒精擦拭玻璃和胶条,能有效防漏,且利于剥胶。
(2)  避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损很重要,尤其是下面和胶条接触的地方。
(3)  关键是找一块很平的桌面,使两块玻璃底面非常齐就行了。
(4)  胶条一定要干,跑完电泳后,胶条就放在实验台上晾着。
(5)  下面的胶条注意不要老化,如果有裂纹的话用保鲜膜垫在上面,也可以有效防止漏胶,或者反过来用。
(6)  玻璃在使用过程中容易造成小的缺口,从而导致封条无法完全密封,装好架子后,在玻璃底边上抹上一层薄薄的凡士林就好了,两边多点(容易从两边漏)这样就不会漏了,就算是用了很久的很多小缺口的玻璃都没有问题,然后转移到电泳槽的时候,去掉封条,把底上的凡士林擦干就OK了(注意,一定要擦干净,尤其是少量进入了两隔玻璃之间空腔的,赢伟凡士林不导电,会影响第2相的效果的。
(7)  你可以在海绵垫下再垫一些纸,使得它与玻璃贴的更紧密。或者在玻璃底部用琼脂糖封上。
(8)  因为两块玻板没有放的完全对齐,底部不在同一个平面,所以封条封不严,重新对齐后就不漏了。以后每次只要在水平的桌面上仔细对齐两块玻板,再夹紧。用手感觉一下确定在同一平面上后,放到灌胶架并压在封条上,卡紧。注意两边均匀用力,一般不会再漏。
(9)  先把两块玻片放在夹子上,不要加紧,放到架子上,使两块玻片的底部对齐,夹紧两块玻片,然后取下再在其下面垫上垫片,这样一般就不会漏胶了。但是如果你放了垫片再对齐玻片底部,或者在桌子上对其玻片底部然后放到架子上的话,经常会漏胶

3.  条带跑得比正常的窄?
(1)可能因为胶凝的不均匀,聚合的不是很好,灌胶的时候尽量混匀。
(2)是不是有窄有宽?可能与你拔梳子的时候有关,拔梳应该迅速,冲洗加样孔的时候要小心,以免把上样带扭曲;胶配好了用枪吹几下再灌胶,还有就是要等指示剂跑到两层胶交界成一线时,再调高电压。
(3)可能是你样品的问题,如果盐浓度较高,便会挤压其它条带,致使条带宽窄不一,由于同样的原因,样品在凝胶中的速度会很慢,造成条带走的较慢,好像与你的预想不一致。
(4)常见的原因是:每孔上样量不均匀,应确保每孔中上样量一致。
(5)可能是系统的ph出了问题,有可能是你的电极缓冲液,也有可能是凝胶缓冲液,更新缓冲液看看,看是否能成功。

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