凝胶电泳的注意事项概述

影响电泳别离的主要因素: 

1. 待别离生物大分子的性质:待别离生物大分子所带的电荷、分子巨细和性质都会对电泳有显着影响。通常来说,子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳搬迁速度越快。 

    2. 缓冲液的性质:缓冲液的pH值会影响待别离生物大分子的解离程度,从而对其带电性质发生影响,溶液pH值间隔其等电点愈远,其所带净电荷量就越大,电泳的速度也就越大,特别关于蛋白质等两性分子,缓冲液pH还会影响到其电泳方向,当缓冲液pH大于蛋白质分子的等电点,蛋白质分子带负电荷,其电泳的方向是指向正极。为了坚持电泳进程中待别离生物大分子的电荷以及缓冲液pH值的稳定性,缓冲液通常要坚持必定的离子强度,通常在0.02-0.2,离子强度过低,则缓冲能力差,但假如离子强度过高,会在待别离分子周围构成较强的带相反电荷的离子分散层(即离子氛),因为离子氛与待别离分子的移动方向相反,它们之间发生了静电引力,因此导致电泳速度下降。另外缓冲液的粘度也会对电泳速度发生影响。 

    3. 电场强度:电场强度(V/cm)是每厘米的电位降,也称电位梯度。电场强度越大,电泳速度越快。但增大电场强度会导致经过介质的电流强度增大,而构成电泳进程发生的热量增大。电流在介质中所做的功(W)为:W=I2.R.t式中:I为电流强度,R为电阻,t为电泳时刻。 

  电流所作的功绝大有些都转换为热,因此导致介质温度升高,这会构成许多影响: 

1、 样品和缓冲离子分散速度添加,导致样品别离带的加宽; 2、 发生对流,导致待别离物的混合; 3、 假如样品对热灵敏,会导致蛋白变性; 

4、 导致介质粘度下降、电阻下降等等。电泳中发生的热通常是由中心向外周发出的,所以介质中心温度通常要高于外周,特别是管状电泳,由此导致中心有些介质相关于外周有些粘度下降,摩擦系数减小,电泳搬迁速度增大,因为中心有些的电泳速度比边际快,所以电泳别离带通常呈弓型。下降电流强度,能够减小生热,但会延长电泳时刻,导致待别离生物大分子分散的添加而影响别离效果。所以电泳实验中要挑选恰当的电场强度,一同能够恰当冷却下降温度以取得较好的别离效果。 

    4. 电渗:液体在电场中,关于固体支撑介质的相对移动,称为电渗景象。因为支撑介质外表可能会存在一些带电基团,如滤纸外表通常有一些羧基,琼脂可能会富含一些硫酸基,而玻璃外表通常有Si-OH基团等等。这些基团电离后会使支撑介质外表带电,吸附一些带相反电荷的离子,在电场的效果下向电极方向移动,构成介质外表溶液的活动,这种景象即是电渗。在pH值高于3时,玻璃外表带负电,吸附溶液中的正电离子,导致玻璃外表邻近溶液层带正电,在电场的效果下,向负极搬迁,股动电极液发生向负极的电渗流。假如电渗方向与待别离分子电泳方向一样,则加速电泳速度;假如相反,则下降电泳速度。 

5. 支撑介质的筛孔:支撑介质的筛孔巨细对待别离生物大分子的电泳搬迁速度有显着的影响。在筛孔大的介质中泳动速度快,反之,则泳动速度慢。  

关于胶收回切胶的一点注意事项: 

1. 电泳的buffer和gel都是新制的,切胶的台子整理洁净,刀片**佳洗净灭菌,总归一句话即是确保切下的带没有外源dna污染。 

2. 切胶是要把全部意图片断所在方位的胶全部收回。为了削减胶的体积,能够用相对比较薄的胶来做,只要够点样即可,也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3. 关于防护,在通常有机玻璃后就足够了,戴上防护面具以维护双眼,假如戴树脂眼镜就能够了。要是十分惧怕紫外照射,或许关于胶有特殊请求,例如请求不含EB,能够采用点marker和带刻度的尺子一同照相的方法来断定意图条带在胶上的方位进行切胶。 

4. 依照正常程序点marker跑胶,然后切下有marker的胶,EB染色,紫外灯下与带刻度的尺子一同照相。因为要收回的带与marker间的相对方位已知,依据尺子来衡量未染色胶上意图带的方位即可。假如觉得很难判别,能够直接在marker边点少数的样,这么方位就简单断定了。

 

以电泳分离带通常呈弓型。降低电流强度,可以减小生热,但会延长电泳时间,引起待分离生物大分子扩散的增加而影响分离效果。所以电泳实验中要选择适当的电场强度,同时可以适当冷却降低温度以获得较好的分离效果。 

    4. 电渗:液体在电场中,对于固体支持介质的相对移动,称为电渗现象。由于支持介质表面可能会存在一些带电基团,如滤纸表面通常有一些羧基,琼脂可能会含有一些硫酸基,而玻璃表面通常有Si-OH基团等等。这些基团电离后会使支持介质表面带电,吸附一些带相反电荷的离子,在电场的作用下向电极方向移动,形成介质表面溶液的流动,这种现象就是电渗。在pH值高于3时,玻璃表面带负电,吸附溶液中的正电离子,引起玻璃表面附近溶液层带正电,在电场的作用下,向负极迁移,带动电极液产生向负极的电渗流。如果电渗方向与待分离分子电泳方向相同,则加快电泳速度;如果相反,则降低电泳速度。 

5. 支持介质的筛孔:支持介质的筛孔大小对待分离生物大分子的电泳迁移速度有明显的影响。在筛孔大的介质中泳动速度快,反之,则泳动速度慢。  

WWW.LIUYI17.COM Corporation of China 2010北京六一仪器厂电泳仪电泳槽凝胶成像系统电泳仪电源 公司简介 联系我们

客服电话
  • 15157563004
  • 15157564050