工作原理:西方印迹的新方法

问题:生命科学研究的支柱,蛋白质印迹通常用于评估相对蛋白质表达差异,例如当调查细胞信号传导途径时。精确的量化需要仔细注意程序细节和归一化。传统上,western印迹是两天的过程,具有许多步骤:电泳,转移,阻断,初次和二次抗体应用和检测。优化通常是具有挑战性的,因为当印迹失败时,很难确定它是导致抗体结合和检测的步骤的结果,还是该问题是否是由于抗体本身。

解决方案:一个可以帮助的系统是来自Bio-Rad Laboratories,Inc。的V3 Western Workflow TM,其使用无污染技术来确认蛋白质分离和转移如预期进行,随后的免疫检测将产生高质量的western印迹数据。这种新系统将工作流程时间减半,而无污染技术确保更快,更准确地定量蛋白质表达水平。

V3 Western Workflow将Bio-Rad的TGX Stain- Free™预制凝胶,TransBlot®Turbo™传输系统和ChemiDoc™MP成像系统集成为一个集成解决方案。

这样的系统通过电泳和转移步骤可以节省大量的时间。例如,TGX无染料凝胶上的运行时间为15分钟,而传统迷你凝胶的运行时间为45分钟。同时,Trans-Blot Turbo在7分钟内实现了蛋白质转移,相比之下,传统油罐方法的转化时间为1小时或过夜。转印效率可比。

凝胶中嵌入的无污染技术通过允许容易的质量控制为蛋白印迹过程增加信心。使用ChemiDoc MP成像系统和TGX无染料凝胶,研究人员可以在一分钟内可视化电泳后凝胶结果,以确保样品不会降解。这代表了比传统的考马斯凝胶染色方法显着的进步,其可能需要长达两个小时来完成,并且不是免疫印迹相容的。ChemiDoc MP还允许研究人员在印迹检测前检查膜,并立即可视化蛋白转移。凝胶随后可以重新成像以确定是否有任何蛋白质残留。

重要的是,无染色成像使总蛋白标准化更准确的定量。总蛋白标准化已显示比常规管家蛋白更一致,其在某些实验条件或样品类型下可变地进行。因此,无污渍技术可以通过消除管家蛋白检测所必需的连续探测或剥离和重复步骤来减少四小时western印迹标准化过程

虽然更快的进程通常会以数据质量为代价,像V3 Western Workflow这样的系统可以提供更快的结果,同时提高这些结果有效的信心。


V3 Western工作流程由五个步骤组成,每个步骤由Bio-Rad的印迹仪器和/或产品系列实现:

1.蛋白分离:Bio-Rad的Criterion™和Mini-PROTEAN®TGX无色™预制凝胶

2.可视化蛋白质:ChemiDoc™MP成像系统

3.转移蛋白:TransBlot®Turbo™转移系统

4.验证传输:ChemiDoc MP成像系统

5.验证蛋白质印迹:ChemiDoc MP成像系统

WWW.LIUYI17.COM Corporation of China 2010北京六一仪器厂电泳仪电泳槽凝胶成像系统电泳仪电源 公司简介 联系我们

客服电话
  • 15157563004
  • 15157564050