在PCR扩增过程中控制污染:制备最佳实践

PCR扩增对污染极其敏感,污染可能会导致结果不正确。这可能令人沮丧和困惑,尤其是如果您知道引物和模板正确,并且具有预期扩增子的确切长度,则尤其如此。模板,基因组DNA或先前反应中的扩增子对试剂的污染会导致过多或意外的信号。良好的实验室规范可以每次帮助控制污染并确保准确的结果。

实验室**佳实践

  • **大限度地减少基因组DNA来源的潜在暴露。掺入DNase以降解DNA链,并确保您的引物跨越两个外显子。此外,通过将“ no-RT”控件整合到实验中,您可以快速识别RNA制备物中的污染物。
  • 创建单向工作流。在单独的干净空间中进行准备的每个步骤,以防止残留污染。将酶,水,引物和探针以及其他配件存放在没有隔离或存储模板的房间中。
  • 集成无尘室和层流柜以保护样品。无尘室和设备可以帮助防止各种外部污染。
  • 使用过滤器提示进行所有移液操作。过滤嘴可在移液器和被测液体之间提供屏障,防止潜在的气溶胶残留。

PCR无管设备

PCR层流柜可以通过采用HEPA过滤技术帮助维持无污染的环境,同时还可以灵活地访问柜中的仪器。PCR通风柜是独立设备,可在几乎任何实验室空间内快速安装,而无需昂贵的管道系统或复杂的接线。

无管层流通风柜是为台式使用而设计的,也可以放置在底座或移动推车上以方便使用。内部空气处理系统的流速为90 fpm,可有效地将潜在的污染物从PCR混合物中带走,而HEPA过滤器对0.3微米颗粒的效率高达99.99%。