凝胶电泳染色:使用什么?

电泳是鉴定和分离大分子的常用实验室程序。它是由莫斯科的一位大学科学家于1800年代初首次观察到的。像许多发现一样,这是偶然的,但事实证明它对许多研究场景都有用。通过施加电流,技术人员可以使用颗粒的负电荷或正电荷,使它们迁移穿过琼脂糖凝胶等多孔基质。当样品中存在带正电的分子时,它们将向负电流(阴极)蠕变,而带负电的分子将向正电流(阳极)迁移。

除了电源和凝胶外,该动力学测试还需要缓冲液以帮助防止温度和pH值过高。所用凝胶的类型取决于样品和应用。凝胶是“固体”,但多孔。在凝胶内,较大的分子将更慢地移动,而较小的分子将快速移动。因此,分子大小是分离样品和鉴定分子的另一种方法。

那么,既然我们了解了电泳的动力学,我们如何看待这些粒子在何处移动?这些分子可能是“宏观”的,但它们仍然太小而无法用肉眼观察。我们实验的**一个必需成分是污点。一组染料使我们可以直观地看到颗粒所经过的路径。从那里,我们可以捕获图像以记录结果。

DNA凝胶污渍

存在几种在凝胶电泳过程中对核酸染色的选择。溴化乙锭(EtBr)是最著名和最常用的DNA染料。它是一种结合DNA的嵌入剂,当暴露于紫外线下时其荧光增加20倍。EtBr是**的DNA染色剂,是许多研究实验室的理想选择。但是,EtBr必须小心使用,因为它是已知的诱变剂。另外,EtBr要求暴露在紫外线下才能看到,但是会发生分子损伤。当将DNA用于下游应用如克隆时,这就提出了一个问题。

电泳凝胶

核酸染色,通过紫外线观察。

已经开发出替代的DNA染料,例如SYBR Safe,它们不具有与EtBR相同的诱变特性。SYBR Safe不被认为是危险的,可以使用实验室的常规污水处理系统进行处理。此外,它在蓝光下发出荧光,从而防止了使用紫外线时发生的DNA损伤。

已显示许多DNA染色剂可抑制聚合酶链反应(PCR)。当需要高PCR效率(例如实时定量PCR)时,可行的DNA染料应为Eva Green。与其他常见的电泳染料相比,它在较小程度上限制了PCR。Eva Green还比EtBr等传统污渍更安全。

蛋白质凝胶污渍

与DNA凝胶类似,蛋白质凝胶染色有多种选择。两种最常见的污渍是考马斯亮蓝和银染。考马斯是一种阴离子染料,可与蛋白质非特异性结合。一旦去除多余的污渍,蛋白质条带将显示为蓝色条带。考马斯染色由于其易用性和可承受的成本而成为最普遍的蛋白质染色方法。

相反,银染色比考马斯亮灵敏,可以检测相对少量的蛋白质。但是,灵敏度是有代价的,因为银染剂还可以与多糖和核酸结合,从而在银染的凝胶上产生杂散带。

**的想法

电泳凝胶和缓冲溶液中的化学物质也会影响染料的性能,因此您的家庭作业也是如此。根据您实验室中的样品,应用和记录的测试结果,选择具有**潜力的良好测试结果。使用有关样品和试剂制备,染料量,胶凝时间和温度,脱色,存储和其他关键任务的**实践。**,记住你的手套!