凝胶电泳实验室程序



凝胶电泳是实验室中用于测量和分类DNA链的一种方法。这是必需的,因为即使在大多数显微镜下观察,正常条件下的DNA仍然很小,无法操作。凝胶电泳实验室使用相对简单的程序,同样的基本技术也可以用于分离单个蛋白质。

凝胶基质

要开始凝胶电泳程序,您**先**创建凝胶。通常,使用称为琼脂糖的物质将凝胶制成薄片。将琼脂糖粉放入烧瓶中,然后放入称为缓冲液的盐水中。加热琼脂糖和缓冲液的混合物,直到两种物质融化在一起,然后倒入成型模具中。然后在凝胶冷却之前,将一种称为梳子的装置放在模具的一端。凝胶冷却后,将梳子移开,只留下很小的缝隙,可用来固定DNA样品。

冷却的琼脂糖混合物(称为凝胶基质)的特殊特性是由于它是用盐水制成的。通电后,基体将变得导电,从而允许电流沿其长度流动。凝胶基质的另一个特殊性能是规则的微观孔的存在。这些孔将使DNA链穿过凝胶基质并促进分选过程。电泳室

下一步是创建一个电泳室。这是一个矩形的小盒子,两端的正极和负极电气连接。腔室通常是浅的,足够小以适合桌面,并由有机玻璃等透明材料制成。

将盐水倒入电泳室的底部,凝胶基质略微浸入该溶液中。盐水有两个作用:帮助电流流动和保持凝胶基质湿润。由于DNA由负电荷推动,因此放置基质,使样品位于负电连接旁边。

制备DNA

然后制备DNA样品。由于几乎看不到溶液中的DNA,因此将一种称为加载缓冲液的着色剂添加到每个单独的样品中。该试剂还可以使DNA溶液增稠,使其流动性更小,更可行。使用移液器将DNA溶液样品转移到凝胶基质的每个交替槽中。在每个样品之​​间的空槽中,放置一些长度已知的DNA溶液(称为DNA标准品),用于实验控制和比较。

打开电源

现在,打开电泳室。在负电源下,您的DNA样品将被迫穿过培养室的整个长度。小DNA链将更快地通过凝胶基质,并且在短时间内它们会与较长,较慢的链分离。着色剂中的染料可让您追踪DNA。您将看不到DNA的各个链,但是相同长度的链会聚在一起。

**后步骤

分离出DNA后,从电泳室中取出基质。然后将DNA染色,以便于测量和检查。