如何阅读凝胶电泳

凝胶电泳是实验室中用于分离DNA(脱氧核糖核酸)的方法。它也可以用于分离RNA和蛋白质。

读取凝胶电泳结果可让研究人员确定样品中链的大小。要了解该过程的工作原理,**先**学习凝胶电泳的定义。

凝胶电泳定义

凝胶电泳是分子生物学中用于确定DNA,RNA和蛋白质的大小和电荷的强大工具。您**先要使用被较大的DNA链中的酶消化的DNA片段。

使用凝胶电泳带强度作为结果,您可以算出片段的大小。然后可以获取DNA指纹。

正如单词的“电”部分所揭示的,凝胶电泳定义需要使用电场。使用一种特殊的机器,该机器包含覆盖电极的缓冲溶液,凝胶悬浮在内部的孔以及电极本身。

凝胶电泳中的凝胶

凝胶电泳仪需要使用形成为平板的凝胶,该凝胶通常由纯化后的海藻琼脂糖琼脂糖制成。

琼脂糖凝胶制成多孔基质,各种大小的带电分子可以通过多孔基质以不同的速度传播。在将凝胶倒入模具之前,将一种称为溴化乙锭(EtBr)的化学物质添加到凝胶溶液中。

如果要分离的DNA或蛋白质分子很小,则可能需要使用聚丙烯酰胺凝胶代替琼脂糖。使用聚丙烯酰胺时请多加注意,因为它具有神经毒性。

将特殊的梳子放在琼脂糖凝胶模具中,然后在固化后小心地取出。**先将DNA片段或其他分子样品与一种特殊的上样染料混合后放在此处。该样染料只是跟踪DNA的运动,因为它是不可见的,否则。

还有一个包含所谓的DNA梯子或标记物的孔。这可作为具有已知条带大小的高质量模板,用于与正在研究的DNA样品进行大小比较。一旦施加电场,这些带负电荷的分子将通过凝胶朝着正极行进。

凝胶电泳结果

一旦分子行进到凝胶末端,就该读取凝胶电泳结果了。凝胶中的EtBr染料很容易与DNA结合,因此可以使用,然后您可以在紫外线下看到DNA荧光带。

您**格外小心,不要触摸溴化乙锭,因为它与DNA的亲和力也意味着它可以放松。因此,它被认为是诱变剂。尽管价格更高,但现在可以使用更新,更安全的染料。

紫外线揭示了DNA或其他分子样品的凝胶电泳带强度。条带在凝胶上的位置揭示了DNA片段的大小。的凝胶电泳条带强度揭示了分子的浓度。

现在,您可以将样品中的DNA条带与DNA阶梯样品进行比较。梯子的已知条带大小将帮助您确定正在研究的DNA的相对大小。

优质凝胶电泳的重要性

凝胶电泳仪已用于DNA指纹和法医。它已帮助研究人员确定有关许多物种基因组的信息。对于这些重要**域,使用高质量的凝胶电泳结果至关重要。

因此,使用高质量的成分并在制作凝胶时要格外小心是至关重要的。防止DNA样品被RNA或蛋白质污染至关重要。

确保使用清洁的缓冲液,小心地倒入凝胶,以使其梳孔均匀形成,并使所有试剂保持在适当的温度下。凝胶电泳带的强度应充满活力且清洁,背景中无任何其他DNA的痕迹,并且RNA或蛋白质的涂片也不会污染凝胶。