琼脂糖凝胶电泳

  • 琼脂糖凝胶电泳是一种用于生物化学,分子生物学,遗传学和临床化学的凝胶电泳方法,用于分离琼脂糖基质中的大分子(例如DNA,RNA或蛋白质)的混合群体。
  • 琼脂糖是从海藻中提取的天然线性聚合物,当在缓冲液中加热并冷却后,可通过氢键形成凝胶基质。
  • 它们是用于分离中型和大型核酸的最受欢迎的介质,并且具有广泛的分离范围。

琼脂糖凝胶电泳原理

凝胶电泳可在固体支持介质(如琼脂糖凝胶)中按大小分离DNA片段。将样品(DNA)吸移到样品孔中,然后在阳极负端施加电流,该电流使带负电荷的DNA向(阴极,正)端迁移(电泳)。迁移速率与大小成正比:较小的碎片移动得更快,并在凝胶底部缠绕。 

通过在凝胶中包含嵌入染料溴化乙锭,可以看到DNA。DNA片段在凝胶中迁移时会吸收染料。紫外线的照射使插入的染料发出荧光。

较大的碎片发出更强烈的荧光。尽管单类分子的每个片段均以等摩尔比例存在,但较小的片段包含的DNA质量较小,吸收的染料较少,因此发出的荧光较少。可以同时运行一组“梯形”已知大小的DNA片段,并将其用于估计其他未知片段的大小。