蛋白质凝胶电泳及染色方法的几点改进

蛋白质凝胶电泳及染色方法的几点改进
SDS - PAGE及染色技术在蛋白质的分析中, 具有设备简单, 操作方便, 所需样品量少( 1 ~100μg) , 分辨率较高等优点, 在分析或研究中应用范围广泛1可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量及少量的制备, 还可用于测定分子量、等电点等〔1 - 2〕1该方法主要依据SDS - 聚丙烯酰胺凝胶体系中, 使蛋白质样品与SDS结合形成带负电荷的复合物, 由于复合物的分子量不同,在电泳中反映出不同的迁移率, 根据标准蛋白质样品在该系统电泳中所作出的标准曲线, 就可以推算出被测蛋白质样品的相对分子量1在聚丙烯酰胺凝胶系统中, 蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小, 而其他因素对电泳迁移率的影响可以忽略不计〔3 - 5〕1因此, 快速有效地利用SDS -PAGE及染色技术进行相关领域研究是十分有必要的
1 材料与方法
111 试剂和主要仪器
SDS、Tris - base、标准分子量蛋白质均购自北京鼎国生物有限公司, 丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺购自华美生物工程公司, 5804R高速冷冻离心机购自Eppendorf公司产品, 紫外分光光度计购自日本岛津, 24D垂直电泳槽北京六一公司产品
112方法
11211凝胶电泳溶液的配制
凝胶溶液、样品处理液、电泳缓冲液及考马斯亮蓝染色液均按文献〔6〕方法配制及存储; 银染液的配制、保存均按文献〔7〕方法1
11212 不同浓度凝胶分离标准分子量蛋白质
采用垂直、不连续SDS - PAGE对标准蛋白质样品和牛血清白蛋白组分五进行分析1凝胶浓度分别为: 浓缩胶浓度为315% , 分离胶浓度分别为8%、10%、12%和15%1将标准蛋白质样品、牛血清白蛋白组分五分别与样品缓冲液等体积混合后沸水浴3 - 5min, 上样1置于电泳仪, 恒流40mA电泳分离各种蛋白质样品1电泳完毕后固定凝胶, 并用银染或考马斯亮兰染色和显色1标准蛋白质样品含有分子量分别为615、1615、2510、3215、4715、6210、8310、17510kD的成分, 作为小、中、大分子量的标准蛋白质, 用牛血清白蛋白组分五(BSA分子量: 6612kD) 与标准蛋白质分别在8%、10%、12%和15%的凝胶中进行电泳, 以进行凝胶浓度选择实验1\
11213 蛋白质凝胶电泳的染色
分离胶用去离子水冲洗干净, 置于含有凝胶体积10倍左右固定液的培养皿中, 室温放置于脱色摇床, 固定4 - 12h1分别采用考马斯亮蓝染和银染, 进行蛋白质凝胶电泳结果分析

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