操作篇:western blot 之增强敏感性

若目的条带未出现,或很淡,可试用以下方法增强发光强度:

1.用清水漂洗膜数分钟,重加发光液进行曝光,可延长曝光时间;

2.将膜在 PBST 或 TTBS 中洗涤 30 min 或更长,期间**少换 2 次液;

3.封闭 40~60 min;

4.一抗杂交,室温 1 h。37℃ 1 h 会更强,但可能增加非特异条带;

5.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期间换 2 次液;

6.二抗杂交,37℃ 1 h;

7.PBST 或 TTBS 洗膜 20 min,期间换 2 次液;

8.发光鉴定;

9.若条带仍未出现或很淡,可以再用 PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min,期间换 2 次液;

10.三抗杂交,室温 1 h。37℃ 1 h 会更强,但可能增加非特异条带。三抗即抗二抗的二抗,比如二抗用羊抗兔,此时三抗可以选择兔抗羊或鼠抗羊等;

11.PBST 或 TTBS 洗涤膜 20 min,期间换 2 次液;

12.发光鉴定。

注:一抗溶液中加入0.2% 叠氮钠后,可4℃存放**少 2 周,存放一个月我也用过,没问题,再长时间还没试过。

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