实验原理
根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白，在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的电泳迁移速率主要取决于亚基分子量的大小。 实验所用仪器
FR-200A全自动紫外与可见分析装置 上海复日科技有限公司
电泳仪 BIO-RAD公司
TS-1型
脱色摇床 江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司 实验用试剂
低分子量蛋白Maker TAKARA 4*上样缓冲 TAKARA
Pagn Blue protein staining solution Fermentas 试剂的配制 1. 贮液的配制 （1） 凝胶储液
取30g丙烯酰胺+0.8g甲叉双丙烯酰胺0.8g ,先用35ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释**100ml，过滤。棕色瓶4℃保存一个月。 （2）1 mol/l Tris-HCL (PH 8.8)
12.1g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解在80ml双蒸水中，用4mol/l盐酸调PH**8.8。再用双蒸水稀释**100ml，保存在4℃冰箱。 （3）1.0 mol/l Tris-HCL (PH 6.8)
6.06g Tris溶解在40ml双蒸水中，用用4mol/l盐酸调PH**6.8。再用双蒸水稀释**50ml，保存在4℃冰箱。 （4）10%过硫酸铵（APS）
0.1g过硫酸铵+1ml双蒸水。使用前新鲜配制（5）Tris–甘氨酸电泳缓冲液的配制（25mmol/L Tris；250mmol/L甘氨酸(pH8.3)）
30.3gTris+ 144.2g甘氨酸+ 10gSDS，双蒸水定容**1L。 每次使用时10倍稀释。 （6） 样品缓冲液
使用4*SDS-PAGE loading buffer(Takara公司)，上样缓冲与样品比例1:3混匀，之后煮沸5min。 2. 凝胶的配制
具体步骤如下：
1、样品制备：40 µL蛋白+5*上样缓冲液10 µL，煮沸5 min，冷却后放冰箱下层保存，备用
2、制胶
1） 用专用的医用棉口罩将胶板擦拭干净，
电泳槽清洗干净，组装模具。
注：必须使用专用的棉口罩擦拭胶板，且轻轻的向一个方向擦拭，以免划坏胶板。
2） 按上表成分配制分离胶，迅速摇匀，沿胶的一边，迅速灌入分离胶，注意勿打入气泡，
迅速水封。 3） 放置1.5h。
4） 倾去蒸馏水，用滤纸将未倒干净的水吸干。
5） 按上表成分配制浓缩胶，迅速摇匀，沿胶的一边，迅速灌入浓缩胶，注意勿打入气泡，
迅速插入齿梳。 6） 放置1h。 注：新配置的凝胶，室温放置5h，使胶充分凝聚、混匀，之后再使用，效果更好。忌马上电泳。
3、配制电泳缓冲及上样
取配好的10*电泳缓冲130ml，用蒸馏水稀释**1300ml。
将制好的凝胶用电泳夹固定**
电泳槽中。注：短板朝里。若只跑一块胶，电泳夹的对面也必须放置一块电泳板。
倒入电泳缓冲液，液面**短板和长板之间。 每孔上样量**大20ul。蛋白Maker上样量7ul。
4、 电泳
80V 45min;120V 45min。
注：若120v 45min后，溴酚蓝指示剂前沿距离电泳板下端太远，可延长电泳时间，或适当增加电压，待跑**距电泳板下端1cm时停止电泳。 5、 剥胶
剥胶过程必须浸在蒸馏水中进行。 6、 水洗
电泳结束后，用蒸馏水洗胶三次，每次10min。 7、 染色
将胶**于
脱色摇床上，使用考马斯亮蓝染色液（fermentas公司）过夜染色。 注：考马斯亮蓝染色液的使用，请严格按照染色液说明上的操作步骤进行。
考马斯亮蓝染液可重复利用3次，使用一次的染液请倒回使用一次的回收瓶中，使用过两次的染色液倒回使用两次的回收瓶中，用满三次才可废弃。 8、 水洗
蒸馏水洗1-2小时，洗去背景色。拍照。 9、 清洗胶板和电泳槽。
注：清洗和擦拭胶板时，请使用专用的医用棉口罩清洗，用水冲洗时，轻轻擦拭，将残留的胶清洗干净，注意不要太用力，以免划坏胶板。洗好后，放置专用的胶架上晾干，晾干后放入相应的胶盒中。 10、
清理实验台，将实验仪器摆放整齐。
