凝胶电泳染色:使用什么?

电泳是鉴定和分离大分子的常用实验室程序。它在19世纪初由莫斯科的一名大学科学家首次观察到。像许多发现一样,这是偶然的,但已被证明对许多研究场景有用。通过施加电力,技术人员使用颗粒的负电荷或正电荷使其通过多孔基质(例如琼脂糖凝胶)迁移。当样品中存在带正电的分子时,它们会向负电流(阴极)蠕变,而带负电荷的分子则会迁移到正电流(阳极)。
 
除了电力和凝胶的来源之外,此动力学测试需要缓冲剂以帮助防止温度和pH极端值。所用凝胶的类型取决于样品和应用。凝胶是“固体”,但多孔。在凝胶中,较大的分子会移动得更慢,而较小的分子会快速移动。因此,分子大小是样品分离和分子鉴定的另一种方式。
所以,现在我们了解了电泳的动力学,我们如何看到这些粒子在哪里移动?分子可能是“宏观的”,但它们仍然太小而不能用肉眼观察。我们实验的最后一个必要成分是染色剂。一组染料可以让我们看到颗粒所走的路径。从那里,我们可以捕捉图像以记录结果。
DNA凝胶染色
存在几种用于在凝胶电泳期间染色核酸的选择。溴化乙锭(EtBr)是最常用的DNA染料。它是一种嵌入剂,与DNA结合,当暴露于紫外线时荧光增加20倍。EtBr是最便宜的DNA染色剂,使其成为许多研究实验室的理想选择。但是,EtBr必须小心使用,因为它是已知的诱变剂。此外,EtBr需要暴露于紫外线下才能看到,但会发生分子破坏。当DNA被用于诸如克隆之类的下游应用时,这就出现了一个问题。
替代DNA染料,如SYBR Safe,已经开发出来,它们不具有与EtBR相同的致突变性质。SYBR Safe不被认为是危险的,可以使用实验室的常规污水系统进行处理。此外,它在蓝光下发出荧光,防止使用紫外光时发生DNA损伤。
 
已显示许多DNA染色剂抑制聚合酶链式反应(PCR)。当需要高PCR效率时,如实时定量PCR,可行的DNA染色剂将是Eva Green。与其他常用电泳染料相比,它在较小程度上限制了PCR。伊娃格林也比传统的污渍如EtBr更安全。
 
蛋白质凝胶污渍
与DNA凝胶相似,染色蛋白凝胶有几种选择。两种最常见的污渍是考马斯亮蓝和银染。考马斯是一种阴离子染料,它非特异性地与蛋白质结合。一旦多余的污渍被去除,蛋白质条带就会显现为蓝色条带。由于易于使用且价格合理,考马斯染色法是蛋白质染色最常用的方法。
相反,银染比考马斯用于检测相对较低量的蛋白质更敏感。但是,灵敏度带来了一个代价,因为银染色也能与多糖和核酸结合,在银染凝胶上产生假带。

WWW.LIUYI17.COM Corporation of China 2010北京六一仪器厂电泳仪电泳槽凝胶成像系统电泳仪电源 公司简介 联系我们

客服电话
  • 15157563004
  • 15157564050