RNA电泳操作步骤

RNA电泳
 
试剂:
琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。
 
步骤
一 5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc)
1. 称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。
2. 加700mL DEPC水溶解。
3. 用2N NaOH调节pH至7.0
4. 在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC
5. 溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0
6. 加DEPC水定容至1L
7. 用0.45um滤膜过滤后避光保存
 
二 RNA样品处理方法
RNA样品 X uL
甲醛 3.5 uL
甲酰胺 4.0 uL
5 x MOPS-EDTA Buffer 4uL
6 x Loading Buffer 3.0 uL
DEPC水 Up to 20 uL
 
混合均匀后,70°C加热5min,迅速冷却至室温。(PCR仪操作)
 
三 甲醛变性琼脂糖凝胶的制备
加1g琼脂糖到31mL DEPC水中,另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC水定容至41mL。将溶液冷却至60°C左右,加入9mL 37%甲醛,倒入胶槽中静置1小时。(胶中加入EB染料)
四 电泳
混匀电泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer电泳液,加样,10v/cm条件下电泳约1小时。电泳期间每隔15min混匀电泳槽中的电泳液一次。
 
 

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