RNA电泳
试剂：
琼脂糖（Agarose）、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。
步骤
一 5 x MOPS-EDTA Buffer的配制（0.1 M MOPS pH7； 5mM EDTA； 10mM NaAc）
1. 称量20.9g的MOPS，置于1L烧杯中。
2. 加700mL DEPC水溶解。
3. 用2N NaOH调节pH**7.0
4. 在上述溶液中加入10mL的1M的NaAC
5. 溶液中加入10mL的0.5M的EDTA pH=8.0
6. 加DEPC水定容**1L
7. 用0.45um滤膜过滤后避光保存
二 RNA样品处理方法
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RNA样品 |
X uL |
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甲醛 |
3.5 uL |
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甲酰胺 |
4.0 uL |
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5 x MOPS-EDTA Buffer |
4uL |
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6 x Loading Buffer |
3.0 uL |
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DEPC水 |
Up to 20 uL |
混合均匀后，70°C加热5min，迅速冷却**室温。（
PCR仪操作）
三 甲醛变性琼脂糖凝胶的制备
加1g琼脂糖到31mL DEPC水中，另加10mL 5 x MOPS-EDTA Buffer煮沸溶解。加入DEPC水定容**41mL。将溶液冷却**60°C左右，加入9mL 37%甲醛，倒入胶槽中静置1小时。（胶中加入EB染料）
四 电泳
混匀
电泳槽中的1 x MOPS-EDTA Buffer电泳液，加样，10v/cm条件下电泳约1小时。电泳期间每隔15min混匀
电泳槽中的电泳液一次。
