毛细管电泳实验常见问题解释

一、无样品峰出现 A、检查电流是否稳定: ①没有电流。 

可能原因——毛细管堵塞或断裂。 

    解决方法——用水冲洗毛细管,并观察是否有水流出,若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂;毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。缓冲溶液需要过滤,将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。 ②电流波动很大,直至几乎消失。 

 可能原因——缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出。     解决方法——将缓冲溶液超声脱气,如果还有此现象发生,则可能是样品区带有析出,可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题;对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。 ③电流初始值较小,后逐渐增大。 

可能原因——样品进样量过大。 

解决方法——减少进样量,通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右。 ④电流正常。可能原因:a样品浓度过低:使用高浓度样品测试,如果无法解决则有可能是以下其他原因。b检测波长设置不正确:请确认被分析物的特征吸收,检查方法中的检测波长设置。c分离极性错误:对于蛋白样品,请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷;对于核酸样品,通常条件下会带负电荷。d样品在毛细管内壁吸附:对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离,或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。e光学检测器或光纤损坏:进行标准样品的测试,如果没有对应的结果出现,则有可能存在硬件问题,请联系工程师。  

B、检查毛细管窗口,是否有透明窗口: 

可能原因——忘记开毛细管窗口或窗口位置不正。 

解决方法——重新开毛细管检测窗口,或将窗口调整到正确位置。  

二、样品峰出现拖尾 

可能原因——样品在毛细管内壁吸附。 

解决方法——对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离,或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。  

三、样品峰形不对称 A、检查毛细管入口: 

可能原因——毛细管入口切口不平齐。解决方法——重新切割毛细管入口,注意毛细管切割方法,不可以用力过猛或反复刮擦。  

B、检查更改样品溶剂: 

可能原因——缓冲溶液与样品溶液电解率差别过大。 解决方法——可采用缓冲溶液作为样品溶剂  

四、样品峰过宽     降低样品进样量: 

a有改善:可能原因——样品浓度太大。解决方法——可降低样品浓度或减少进样量。 

b无改善:可能原因——样品本身性质不均一。解决方法——此原因主要是针对蛋白样品,小分子样品发生的概率较低。  

五、迁移时间不稳定 

①出峰时间不稳定且无规律:可能原因——缓冲溶液与毛细管内壁平衡较慢。解决方法——每次样品运行之间避免用NaOH冲洗毛细管。 ②出峰时间依次后延:可能原因——样品中有物质易发生吸附。解决方法——首先在每次样品运行之前用0.1N NaOH短时间冲洗毛细管,看迁移时间能否重复,如果效果不佳请使用涂层毛细管来改善结果或者将样品再次处理,以去除样品中易吸附的组分。六、峰形和出峰时间不稳定     更换缓冲溶液种类: 

①峰形和时间稳定:可能原因——缓冲溶液不稳定,易电解,或者是样品在原缓冲溶液条件下不稳定。解决方法——更换其它种类的缓冲溶液。 

②峰形和出峰情况仍不稳定:可能原因——样品中物质易在毛细管内壁吸附。解决方法——可采用涂层毛细管来克服此问题,或对样品进行前处理。  

七、电流泄漏(Current Leakage)     检查毛细管是否在窗口处断裂 

①毛细管断裂。可能原因——毛细管内缓冲溶液流出造成电流泄漏。解决方法——更换新毛细管,并用水清洗光纤头及检测窗口。 ②毛细管无断裂。可能原因——实验环境湿度过大。解决方法——使用抽湿机,并打开仪器Cartridge Cover;如果没有抽湿机可以使用空调,在湿度过大的情况下可在仪器关闭时放置干燥剂,但是在仪器运行时一定要将干燥剂取出。  

八、无法加气压 

    检查瓶塞是否盖紧或更换瓶塞。 

①更换后问题解决。可能原因a瓶塞老化,失去弹性。解决方法——请购买新的瓶塞,并注意瓶塞不可烘干,只能自然晾干。b瓶颈处有液体,导致瓶塞易滑。解决方法——向瓶中装液体时不要过满,也不要沾湿瓶颈。 

②若瓶塞无问题,可先采用真空方式,若真空方式可以使用,但压力仍不可用。可能原因——压力系统问题。解决方法——请联系工程师。  

九、迁移时间可重复但峰面积重复性不好     重新切割毛细管两端。 

①若问题解决。可能原因——毛细管入口处不平。解决方法——重新切割毛细管入口,注意毛细管切割方法,不可以用力过猛或反复刮擦。 ②问题依然存在,尝试电动进样。可能原因——若电动进样可保持重现,则压力控制或气路存在问题。解决方法——请联系工程师。  

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